자주 묻는 질문

기존 PCR 클로닝과 비교하여 유전자 합성의 장점은 무엇입니까?

유전자 합성은 기존 PCR 클로닝 방법과 비교하여 정확하며 후속 유전자 기능 검증에 영향을 주지 않는 제품을 목표로 합니다.

코돈 최적화는 표적 단백질의 발현 및 용해도를 향상시킬 수 있습니다.

일반적인 PCR 클로닝 방법에 의한 조직 특이적 cDNA 라이브러리의 구축은 시간과 비용이 많이 듭니다.

유전자 합성 처리 시간은 template 및 효소 제한 부위에 의존하지 않고 빠르며 비용이 효율적입니다.

기존의 PCR 클로닝 기술로는 얻을 수 없지만 유전자 합성으로 합성할 수 있는 어려운 유전자 서열의 경우도 가능합니다.

GenCefe 유전자 합성 서비스의 장점은 무엇입니까?

빠른 처리 시간: 8일부터 배송됩니다.

고품질: sanger 시퀀싱 방법으로 100% 염기서열 정확도가 보장됩니다.

복잡하고 어려운 유전자 합성: 복잡하고, GC가 풍부하고, 반복되거나, 긴 유전자 합성에 대한 전문 지식과 경험을 보유하고 있습니다.

고급 코돈 최적화 기술: GenCefe는 무료 코돈 최적화 서비스를 제공합니다.

GenCefe는 DNA 추출, 분리, 세척 및 정제를 수행합니까?

예, GenCefe는 genomic DNA를 제외한 다양한 규모와 등급의 플라스미드 준비 서비스를 제공하며 맞춤형 PCR 분리 및 세척도 제공할 수 있습니다.

GenCefe는 DNA 시퀀싱, 결과 분석 및 둘 이상의 샘플 간의 친족 관계 해석을 위한 서비스를 제공합니까?

DNA 시퀀싱 서비스를 수행할 수 있으며 결과에서 발견된 돌연변이를 분석/요약할 수도 있지만 결과에 대한 해석은 제공하지 않습니다.

내 시퀀스를 기밀로 유지할 수 있습니까?

예, 모든 고객 정보는 기밀로 유지되며 NDA(기밀 유지 계약)에 서명할 수 있습니다.

코돈 최적화는 필요한가요?

코돈 최적화는 단백질/항체 발현의 대부분의 경우에 사용됩니다. 예를 들어, 어떤 경우에는 진핵 유전자를 원핵 생물에서 발현시켜야 합니다. 진핵생물의 코돈 선호도는 원핵생물의 코돈 선호도와 매우 다르기 때문에 유전자의 코돈 최적화는 발현 효율을 크게 향상시킬 수 있습니다.

긴급 유전자 합성 서비스가 있습니까?

예. 프로젝트 관리자에게 연락하여 프로젝트 세부 사항에 대해 이야기하십시오.

pUC57를 통해 유전자를 받았는데 왜 염기서열 양쪽 끝에 염기쌍을 추가했나요?

blunt end ligation을 보호하기 위한 염기들입니다.

유전자/구조물의 저장 상태는 무엇입니까?

동결 건조된 유전자는 실온 또는 -20°C에서 보관할 수 있습니다. 한 번 녹인 후에는, 단기적으로 4°C, 장기적으로는 -20°C에서 보관해야 합니다.

어떤 QC 데이터를 얻을 수 있습니까?

염기서열 모 데이터, 정렬된 염기서열, 제한효소 분해 분석 결과가 있는 COA, 플라스미드 맵.

시퀀싱 결과를 열려면 어떤 소프트웨어가 필요합니까?

AB1 파일은 크로마토그램의 원시 파일이며 DNAstar, 시퀀서 또는 크로마스와 같은 시퀀싱 분석 소프트웨어에서 열 수 있습니다. SDQ 파일은 DNAstar에서 열어야 하는 데이터이며 Adobe Reader에서 열 수 있는 이 데이터의 PDF 파일은 인쇄 가능합니다.

다른 회사에서 템플릿/벡터를 구입할 수 있습니까?

예, 시도해 볼 수 있지만 일부 회사는 라이센스 문제로 인해 상업 기관에 벡터를 판매하지 않습니다., 학계 출신이라면 구매하여 배송해 주시는 것이 좋습니다.

어떤 방식의 플라스미드 샘플을 제공 해야합니까?

우리는 여과지에서 건조한 샘플을 선호합니다. 그러나 필요한 경우 어떤 버퍼 용액이든 용해된 DNA 역시 가능합니다.

당신이 만든 클론을 시퀀싱합니까?

모든 분자 클로닝 서비스에는 서열 검증이 포함됩니다.

프로젝트 (분자 생물학 프로젝트)를 완료 할 수없는 경우에도 비용을 지불해야합니까?

제품을 배송할 수 없는 경우 요금이 청구되지 않습니다. 부분 구성을 제공할 수 있는 경우 수행된 작업의 일부에 대해 비용을 지불합니다.

주문 확인이란 무엇입니까? 왜 확인이 필요한가요?

우리는 고객에게 주문 요약 내용을 보내고, 이 이메일을 통해 주문을 확인하기 위한 고객의 답장이 필요합니다. 이는 프로젝트가 시작되기 전에 주문 정보가 정확한지 확인하기 위한 것입니다. 분자 생물학 주문에는 확인이 필요합니다.

주문을 변경하거나 취소하려면 어떻게 해야 합니까?

주문이 확정되지 않은 경우 언제든지 변경 또는 취소할 수 있으며, 주문이 확정되면 변경 또는 취소를 원할 경우 요금이 부과됩니다. 주문을 변경/취소하려면 프로젝트 관리자에게 문의해야 합니다.

발송에 본인의 FedEx 고객번호를 사용할 수 있습니까?

예, FedEx 고객번호가 있는 경우 배송에 사용할 수 있지만 취급 수수료가 부과됩니다.

단백질 태그 선택

1. 플라스미드를 구성할 때 단백질 태그를 선택하는 방법은 무엇입니까?

일반적으로 사용되는 단백질 태그에는 6xHIS, Flag, GST, c-Myc, eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP, HA, SUMO 등이 있습니다. 실험의 목적에 따라 적절한 태그를 선택해야 합니다.

1) 6xHis

6xHis는 표적 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 삽입되어 단백질 분리 및 정제를 용이하게 할 수 있습니다. His 태그 융합 단백질은 비이온성 계면활성제의 존재 하에서 또는 변성 조건 하에서 정제가 가능합니다. 전자는 소수성이 높은 단백질을 정제하는 데 사용되며, 후자는 봉입체 단백질을 정제하는 데 특히 유용합니다. 벡터는 6xHis를 포함합니다: pET-28a(+), pET-28b, pET-22b(+), pcDNA3.1(+)_myc-hisA, pACYC-duet1 등.

2) Flag tag

플래그 태그 플래그 태그는 단백질 발현, 정제, 식별, 기능적 연구 및 단백질 상호 작용에 널리 사용됩니다. 벡터에는 pESC-His, pFLAG-CMV2, pENTR4-FLAG 등의 Flag 태그가 포함됩니다.

3) c-Myc C-Myc

이 태그는 11개의 아미노산을 포함하는 작은 태그입니다. 이 11개의 아미노산은 각기 다른 단백질 프레임워크에서 에피토프로 발현되며 여전히 해당 항체를 인식할 수 있습니다. C-Myc 태그는 표적 세포에서 재조합 단백질의 발현을 검출하기 위해 웨스턴 블롯, 면역침전 및 유세포 분석에 성공적으로 활용되었습니다. 벡터는 c-Myc: pCMV-MYC, pcDNA3.1(+)_myc-hisA, pCMV-RFP-C-Myc, pCMV-Myc 등을 포함합니다.

4) eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP

이 태그는 여기 파장과 방출 파장이 다른 강화된 녹색 형광 단백질, 향상된 황록색 형광 단백질, 강화된 황록색 형광 단백질 및 단량체 적색 형광 단백질입니다. 이 단백질 태그는 아미노산 돌연변이 및 코돈 최적화를 통해 야생형 형광 단백질에서 파생됩니다. 벡터에는 eGFP: pEGFP-N1, pEGFP-C1, pcDNA3.1-EGFP, pIRES-EGFP 등이 포함됩니다.

5)SUMO

태그 단백질은 소분자 유비퀴틴-유사 변형 단백질입니다. 재조합 단백질 발현을 위한 융합 태그 및 분자 샤페론으로서 SUMO는 융합 단백질의 발현을 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라 프로테아제 가수분해에 저항하고 표적 단백질의 올바른 접힘을 촉진하며 재조합 단백질의 용해도를 향상시키는 기능을 가지고 있습니다. SUMO 태그는 또한 특정 효소 절단 부위로 다른 태그와 함께 사용됩니다. 벡터에는 SPAT 태그(pET-SUMO, pET28a-SUMO 등)가 포함되어 있습니다.

2. 단백질 태그를 선택할 때 분자량을 고려해야 합니까?

일반적으로 단백질 태그가 클수록 단백질의 기능에 미치는 영향이 커지므로 거대분자 태그는 일반적으로 검출 또는 단백질 정제에만 사용됩니다. 분자량이 작은 일반적인 태그는 His-Tag, Flag-Tag, HA-Tag, Myc-Tag로, 아미노산이 몇 개뿐이며 이러한 단백질 태그에 대해 상업적으로 이용 가능한 항체가 많이 있습니다. 이러한 태그를 사용하면 단클론 항체를 준비하는 데 드는 비용과 시간을 절약할 수 있습니다. 거대분자의 일반적인 단백질 태그에는 SUMO, GFP, GST 등이 포함됩니다.

3. 단백질 태그를 제거해야 하나요?

태그 제거는 일반적으로 표적 단백질의 사용을 용이하게 하기 위해 수행됩니다. 따라서, 벡터를 설계하고 구성할 때, 태그 단백질과 외래 단백질 서열 사이에 단백질 분해효소 인식 부위를 추가할 수 있어, 단백질 분해효소 절단에 의해 표적 단백질의 태그를 제거하여 완전한 표적 단백질을 얻을 수 있습니다. 이러한 반응에 일반적으로 사용되는 프로테아제 부위는 HRV 3C 프로테아제 절단 부위, TEV 프로테아제 절단 부위, 엔테로키나제 절단 부위, SUMO 프로테아제 절단 부위 등입니다. 태그 제거를 위한 몇 가지 팁이 있습니다.

1) 이러한 프로테아제 절단 부위의 특이성은 상대적으로 높지만 절단 효율은 다릅니다.

2) SUMO 프로테아제를 제외하고 일반적으로 사용되는 다른 프로테아제는 태그를 제거한 후 여러 아미노산 잔류물을 남깁니다. SUMO 프로테아제는 SUMO 태그의 공간 구조를 인식한 다음 여분의 아미노산 잔기를 남기지 않고 이 태그를 완전히 제거합니다.

3) 프로테아제의 절단 효율은 인식 부위 근처의 아미노산 잔기의 특성에도 영향을 받습니다. 자세한 내용은 참고자료를 참고하시기 바랍니다.

4) 일부 태그는 상대적으로 작고 면역원성이 낮으며 유지될 경우 추가 연구 및 적용에 영향을 미치지 않습니다. 그러나 Dsb 단백질, FkpA 단백질, GST 단백질, SUMO 태그 등과 같은 일부 큰 태그는 여전히 제거해야 합니다.

4. 단백질 태그를 N-말단 또는 C-말단에 추가해야 합니까?

단백질 구조와 위치의 특성에 달려 있습니다. 예를 들어, 쉽게 분해되고 발현하기 어려운 단백질의 경우 5' 말단의 단백질 태그를 사용할 수 있습니다. 이는 단백질의 안정성을 보장할 뿐만 아니라 외래 단백질의 면역원성에 거의 영향을 미치지 않습니다. 이 방법은 에피토프 스크리닝에 적합합니다. 그러나 표적 단백질이 분비된 단백질인 경우 표적 단백질이 골지체로 분비되는 동안 단백질의 5' 말단에 있는 신호 펩티드가 효소에 의해 절단되는 문제가 발생합니다. 이런 경우엔 5' 말단에 태그를 추가하지 않는 것이 좋습니다.

5. His 태그가 C-terminal His 태그 직후에 종료되지 않으면 His 태그의 특성에 영향을 줍니까?

His 분리 및 정제의 원리는 히스티딘 잔기의 측쇄가 고체 니켈에 강한 인력을 갖는다는 것입니다. 재조합 단백질을 분리하고 정제하기 위해 고정된 금속 킬레이트화 크로마토그래피(IMAC)에 사용할 수 있습니다. C-말단 His 태그 뒤에 정지 코돈이 추가되지 않으면, 여분의 아미노산은 His 태그의 공간적 형태에 영향을 미치고 His 흡착 효과에 영향을 미칠 수 있다.

참조:

[1] Carson M , Johnson D H , Mcdonald H , et al. His-tag impact on structure. Acta Crystallographica, 2007, 63(3):295-301.

[2] Lichty J J , Malecki J L , Agnew H D , et al. Comparison of affinity tags for protein purification. Protein Expr Purif, 2005, 41(1):0-105.

[3] Kim K I, Baek S H, Chung C H. Versatile protein tag, SUMO: its enzymology and biological function. Journal of Cellular Physiology, 2002, 191(3):257–268.

[4] Porath J , Carlsson J , Olsson I , et al. Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation. Nature, 1975, 258(5536):598-9. Terpe K. Protein Tags[M]. 2005.

[5] Wilkins M R, Gasteiger E, Tonella L, et al. Protein identification with N and C-terminal sequence tags in proteome projects. Journal of Molecular Biology, 1998, 278(3):599-608.

업데이트 예정

업데이트 예정